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使用胰酶時(shí)，有哪些注意事項(xiàng)

2021-12-24 瀏覽次數(shù)：2630

胰酶的作用原理是什么呢？

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)細(xì)胞在自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。

使用胰酶時(shí)需注意哪些細(xì)節(jié)問(wèn)題？

在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差，做流式時(shí)的CD Marker也可能會(huì)下降。胰酶進(jìn)行分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)液體體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。

注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，這時(shí)就應(yīng)該停止消化。

如何選擇正確的細(xì)胞消化試劑？

BI提供動(dòng)物來(lái)源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。

動(dòng)物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細(xì)胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細(xì)胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育，這樣易于控制，對(duì)細(xì)胞的傷害也降低。對(duì)于難消化的細(xì)胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是無(wú)限地延長(zhǎng)消化時(shí)間。重組胰酶用于無(wú)血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動(dòng)物源性胰蛋白酶相同的酶學(xué)性質(zhì)，但是不含任何動(dòng)物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于細(xì)胞治療）。

EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？

許多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA聯(lián)合作用。胰酶切割ECM（負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白），而EDTA通過(guò)螯合Ca²⁺，抑制Integrin的貼壁活性，所以EDTA的作用更加溫和。

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